В биологических экспериментах ультрафильтрация является эффективным методом для концентрирования, обессоливания и замены буфера. Благодаря наличию четырех вариантов объема (0,5 мл, 2 мл, 4 мл, 15 мл) и семи вариантов предельного молекулярного веса (MWCO) (2 кДа, 3 кДа, 10 кДа, 30 кДа, 50 кДа, 100 кДа, 300 кДа) выбор наиболее подходящего центрифужного фильтра имеет решающее значение для успеха эксперимента.
Часть 1: Руководство по выбору объема
1.1 Принципы выбора размера фильтра
Выберите центрифужный фильтр подходящего размера с учетом исходного объема пробы и требований к производительности. Конструкция каждого фильтра определяет сферу его применения:
Центрифужный фильтр объемом 0,5 мл — для ценных проб с малым объемом
Типичные области применения: ценные пробы, небольшие исходные объемы (<500 мкл), высокие требования к выходу; совместим со стандартными роторами с фиксированным углом наклона объемом 1,5/2 мл.
Характеристики: конструкция из двух пробирок (концентратор + пробирка для сбора). После центрифугирования пробирка-концентратор переворачивается и центрифугируется на низкой скорости для переноса ретентата в пробирку для сбора, что сводит к минимуму мертвый объем и потери при адсорбции.
Основные параметры: конечный объем концентрата прибл. 15–30 мкл; максимальная центробежная сила до 14 000 xg.
Центрифужный фильтр объемом 2 мл — подходит для стандартных центрифуг
Типичные области применения: совместим с роторами или адаптерами для конических пробирок объемом 15 мл; подходит как для роторов с поворотными чашами, так и для роторов с фиксированным углом наклона; рутинное определение концентрации белков.
Рабочие характеристики: Трехкомпонентная конструкция (ультрафильтрационное устройство + пробирка для ретентата + пробирка для фильтрата). Требуется обратное извлечение. Предназначен для проб объемом до 2 мл, конечный объем составляет 30–70 мкл.
Центрифужный фильтр объёмом 4 мл — средняя пропускная способность
Типичные области применения: обработка около 4 мл образца; подходит для лабораторных центрифуг с роторами ковшового или фиксированного типа.
Особенности эксплуатации: состоит из крышки + устройства для ультрафильтрации + центрифужной пробирки. Переворачивать не нужно – просто вставьте наконечник пипетки вдоль боковой стенки, чтобы извлечь концентрат со дна внутренней пробирки (объем извлечения 80–200 мкл). Более удобен в использовании, чем варианты объемом 0,5 мл и 2 мл.
Центрифужный фильтр объёмом 15 мл — для подготовки больших объемов
Типичные области применения: подготовка проб в больших объёмах, например, обработка белков/антител, концентрирование нуклеиновых кислот и вирусов.
Рабочие характеристики: совместим с центрифугами большой емкости. Максимальный объем загрузки до 15 мл (колебательная центрифуга) или 12 мл (центрифуга с фиксированным углом). Объем извлечения 150–300 мкл. Прямой пипетирование извлеченного объема – позволяет избежать царапин на поверхности мембраны при извлечении.
Часть 2: Руководство по выбору MWCO
2.1 Принципы выбора MWCO
Золотое правило: для достижения оптимальной степени удержания следует выбирать фильтрующую мембрану с MWCO, значение которого в 2–3 раза меньше молекулярной массы растворенного вещества, которое необходимо сконцентрировать.
2.2 Таблица быстрого выбора по применению
Таблица выбора по применению для белков
*Для концентрирования и буферного обмена антител, ферментов, антигенов и аналогичных образцов
Таблица выбора методов работы с нуклеиновыми кислотами
*Для концентрирования и обессоливания ДНК, РНК и плазмид
Рекомендации по применению
- Обессоливание и замена буфера: рекомендуется использовать мембраны с молекулярной массой 3 кДа, 10 кДа или 30 кДа. Это основано на принципе, согласно которому низкомолекулярные соли проходят через мембрану, а высокомолекулярные белки задерживаются.
- Концентрация/удаление вирусов: рекомендуется использовать мембраны с размером пор 100 кДа или 300 кДа. Используется для выделения вирусных частиц из клеточных лизатов.
- Удаление праймеров/адаптеров: рекомендуется использовать мембраны с размером пор 30 кДа или 50 кДа. Используется для очистки после реакции в молекулярной биологии с целью удаления примесей в виде мелких фрагментов.
3.1 Меры предосторожности при эксплуатации
После смачивания ультрафильтрационной мембраны она должна оставаться влажной до завершения использования.
3.2 Регулирование центробежной силы
Наибольшую устойчивость к центробежной силе (до 14 000 xg) демонстрирует размер 0,5 мл.
Для размеров 4 мл и 15 мл при использовании мембран с крупными порами 100K и 300K центробежную силу следует соответствующим образом уменьшить (например, для 100 кДа рекомендуется ≤3000 xg), чтобы избежать повреждения структуры мембраны.
3.3 Химическая совместимость
Серия Briscale™ демонстрирует хорошую совместимость с распространенными буферами, 8 М мочевиной, 6 М гидрохлоридом гуанидина, 70% этанолом и т. д. Однако при использовании таких реагентов, как DMSO, рекомендуется ограничить время контакта до 2 часов.
Заключение
Правильный выбор центрифужного фильтра делает ваши эксперименты более эффективными и результативными. Мы надеемся, что это руководство по выбору, основанное на линейке продуктов Cobetter Briscale™, поможет вам точно выделить интересующие вас молекулы, сделав каждую центрифугировку высокоэффективной и обеспечивающей высокий выход!