Применение фильтров Cobetter ViruClear™ для удаления вирусов в процессе производства вакцины против герпеса

Опоясывающий лишай вызывается вирусом ветряной оспы. Заражение этим вирусом в детском возрасте приводит к ветряной оспе, а после выздоровления вирус остается в латентном состоянии в нервных ганглиях. Когда человек стареет, испытывает усталость или имеет ослабленный иммунитет, вирус может «реактивироваться», распространяясь по нервным волокнам к коже и вызывая скопления пузырьков и сильную боль. Вакцинация является ключом к профилактике опоясывающего лишая. В этой статье будет кратко представлено применение фильтров Cobetter для удаления вирусов в процессе производства вакцины против опоясывающего лишая.

В прошлом веке широко использовались вакцины на основе аттенуированных вирусов. В настоящее время основное внимание уделяется рекомбинантным белковым вакцинам, которые производятся с использованием высокоразвитых и безопасных технологий. Кроме того, в настоящее время проводятся клинические исследования новых типов вакцин, таких как мРНК-вакцины против опоясывающего герпеса. На примере рекомбинантной вакцины против герпеса на основе клеток CHO можно сказать, что она может производить антигены, структура которых наиболее близка к естественной форме и обладает оптимальной иммуногенностью. В то же время она основана на зрелом, стабильном и масштабируемом промышленном производственном процессе, обеспечивающем высокое качество, высокую производительность и возможность глобальных поставок.

Продукты, полученные на основе клеток CHO, сначала подвергаются глубокой фильтрации для получения супернатанта. Затем проводится анионообменная хроматография для захвата целевого белка. После замены буфера для промежуточной очистки используется гидрофобная хроматография, а для доочистки — катионообменная хроматография, чтобы удалить примеси, связанные с процессом и продуктом.

Процесс хроматографической очистки рекомбинантной вакцины против опоясывающего лишая

Фильтрация вирусов, как наиболее важный этап удаления вирусов во всем процессе, обычно проводится после этапа финишной очистки. Однако, учитывая свойства целевого белка и этапы его очистки, фильтрация вирусов рекомбинантного белка для вакцины против герпеса сталкивается с такими проблемами, как низкая концентрация белка, низкая скорость потока и быстрое снижение потока. Поэтому существует высокая потребность в устойчивости вирусных фильтров к загрязнению, что требует проведения обширных экспериментов по отбору наиболее подходящих фильтров.

Эффективность фильтрации с помощью фильтров Cobetter PNY＋ViruClear VF Plus
(Раствор белка: ~1,5 г/л Давление фильтрации: 30 фунтов на квадратный дюйм)

Экспериментальный вывод:
В данном случае было использовано последовательное соединение фильтров PNY и ViruClear. Целевой белок был относительно легко отфильтрован, что позволило поддерживать стабильный поток.

Эффективность фильтрации фильтров Cobetter PDT＋ViruClear VF Plus
(Раствор белка: 2~3 г/л Давление фильтрации: 30 фунтов на квадратный дюйм)

Экспериментальный вывод:
В данном случае использование PNY + ViruClear в серийной фильтрации привело к непрерывному снижению потока. Для дальнейшей оптимизации процесса необходимо применять PDT + ViruClear VF Plus. Однако следует отметить, что защитные фильтры для удаления вирусов на основе глубинной фильтрации могут проявлять потенциальный адсорбционный эффект, что приводит к низкому выходу белка/антигена.

Эффективность фильтрации фильтров Cobetter PNY＋ViruClear VF Plus/RCH
(Раствор белка: 0,1~1,0 г/л Давление фильтрации: 30 psi)

Экспериментальный вывод:
Если сам целевой белок обладает сильной гидрофобностью, а компоненты буфера содержат специальные ингредиенты, такие как стабилизаторы, это может привести к чрезмерно быстрому снижению потока. В этом случае после перехода на фильтр для удаления вирусов ViruClear RCH с мембраной из регенерированной целлюлозы поток может поддерживаться на стабильном уровне как до, так и после фильтрации.

1. Фильтр ViruClear PNY (нейлоновая мембрана) рекомендуется в качестве предварительного фильтра для удаления вирусов, поскольку он эффективно адсорбирует гидрофобные примеси, не оказывая значительного влияния на выход белка или антигена.

2. Фильтр ViruClear VF Plus (PES-мембрана) подходит для рекомбинантных целевых белков с низкой концентрацией и слабой гидрофобностью. Если требуется более высокая загрузочная способность, рекомендуется использовать фильтр ViruClear VF Plus X (PES).

3. Фильтр ViruClear RCH (RC-мембрана) подходит для целевых белков с высокой концентрацией и сильной гидрофобностью, которые склонны к загрязнению.

Благодаря многочисленным совместным проектам с клиентами по фильтрации рекомбинантных вакцин против опоясывающего лишая, выращенных в клетках CHO, компания Cobetter накопила значительный опыт в области фильтрации вирусов, помогая клиентам наращивать производство до сотен литров, завершать валидацию VC для подачи заявок IND и BLA и, в конечном итоге, создавать платформенные решения для фильтрации вирусов.