На современном фармацевтическом рынке одобренные препараты на основе антител можно разделить на два основных типа: моноклональные антитела и мультиспецифические антитела. При их производстве первый шаг Downstream этапа часто подразумевает использование аффинной хроматографии на белке А для эффективного отделения целевого продукта от различных примесей. После этого этапа чистота продукта может достигать 95 % и более. Следующим шагом является финишная хроматография, которая направлена на удаление остаточных примесей (таких как белки клеток-хозяев (HCP), ДНК, остатки белка А, вирусы, эндотоксины, агрегаты и т. д.) для получения целевой молекулы более высокой чистоты. Как правило, анионообменная хроматография является широко используемым методом в финишной очистке антител.
Изоэлектрические точки (pI) большинства молекул антител являются нейтральными или щелочными, в то время как примеси, такие как большинство белков клеток-хозяев (HCP), ДНК клеток-хозяев (HCD), остатки белка А, вирусы и эндотоксины, обычно имеют кислотные изоэлектрические точки. Поэтому для удаления таких примесей обычно применяется анионообменная хроматография в проточном режиме.
Традиционная анионообменная хроматография часто используется для анионообменных процессов. Однако с появлением мембранного адсорбера Cobetter Purcise™ Q (хромо) он продемонстрировал значительно более высокую эффективность по сравнению с традиционными сорбентами в процессах анионной очистки антител. Далее мы сравним и представим применение мембранного адсорбера Cobetter Purcise™ Q (хромо) в процессе очистки анионов антител на примере трех конкретных случаев.
Пример 1: Сравнение эффективности анионообменной хроматографии для моноклонального антитела
Информация о продукте:
Моноклональное антитело, концентрация 10,7 г/л, pH 7,0, проводимость 5,4 мСм/см.
Хроматографические методы:
(1) Мембранный адсорбер Cobetter Purcise™ Q (хроматография), объем слоя 0,9 мл, № детали: CXD32EAQ16CC1P.
(2) Анионообменный сорбент, объем колонки 4,6 мл.
Параметры процесса:
(1) Для мембранного адсорбера Cobetter Purcise™ Q (хроматография): скорость потока 9 мл/мин, время удержания 6 с, загрузочная способность 2000 г/л, сбор фракций.
(2) Для анионообменного сорбента: скорость потока 0,92 мл/мин, время удержания 5 мин, загрузочная способность 120 г/л.
(3) Продолжительность процесса: мембранный адсорбер Purcise™ Q (хроматография) <1 ч; сорбент 2–3 ч.
Сравнение результатов
Результаты эксперимента №1
По результатам предварительных испытаний этого моноклонального антитела, мембранный адсорбер Purcise™ Q (хроматография) достигает эффективности очистки при загрузочной способности 2000 г/л, сопоставимой с эффективностью традиционного сорбента при 120 г/л, с сопоставимыми уровнями остаточного HCP и производительностью.
Пример 2: Сравнение эффективности анионообменной хроматографии для биспецифического антитела
Информация о продукте:
Биспецифическое антитело, концентрация 6,0 г/л, pH 7,0, проводимость 5,4 мСм/см.
Хроматографические методы:
(1) Мембранный адсорбер Cobetter Purcise™ Q (хроматография), объем слоя 0,9 мл, № детали: CXD32EAQ16CC1P.
(2) Анионный сорбент, объем колонки 5 мл.
Параметры процесса:
(1) Для мембранного адсорбера Cobetter Purcise™ Q (хроматография): скорость потока 9 мл/мин, время удержания 6 с, загрузочная способность 2000 г/л, сбор фракций.
(2) Для анионовой смолы конкретного производителя: скорость процесса 1 мл/мин, время удержания 5 мин, загрузочная способность 120 г/л.
(3) Продолжительность процесса: мембранный адсорбер Purcise™ Q (хроматография) <1 ч; смола конкретного производителя 2–3 ч.
Сравнение результатов
Результаты эксперимента №2
По результатам предварительных испытаний этого биспецифического антитела, мембранный адсорбер Purcise™ Q (хроматография) достигает эффективности очистки при загрузочной способности 2000 г/л, сопоставимой с эффективностью традиционного сорбента при 120 г/л, с сопоставимыми уровнями остаточного HCP и производительностью.
Пример 3: Сравнение эффективности анионообменной хроматографии для биспецифического антитела
Информация о продукте:
Биспецифическое антитело, концентрация 23,0 г/л, pH 6,7, проводимость 3,5 мСм/см.
Хроматографические методы:
(1) Мембранный адсорбер Cobetter Purcise™ Q (хроматография), объем слоя 0,9 мл, № детали: CXD32EAQ16CC1P.
(2) Анионная смола от конкретного производителя, объем колонки 5,3 мл.
Параметры процесса:
(1) Для мембранного адсорбера Cobetter Purcise™ Q (хроматография): скорость потока 9 мл/мин, время удержания 6 с, загрузочная способность 350 г/л, сбор фракций.
(2) Для анионовой смолы конкретного производителя: скорость потока процесса 0,88 мл/мин, время удержания 6 мин, загрузочная способность 90 г/л.
(3) Продолжительность процесса: мембранный адсорбер Purcise™ Q (хроматография) <0,5 ч; смола конкретного производителя 2–3 ч.
Сравнение результатов
Результаты эксперимента №3
Для этого биспецифического антитела Purcise™ Q Membrane Adsorber (хроматография) по-прежнему может достигать того же уровня удаления HCP, что и сорбент для хроматографии, при тех же условиях, с 2-кратной или 4-кратной загрузкой (90 мг/мл). Во всех сценариях уровни HCP эффективно контролируются на уровне ниже 10 ppm.
Выводы
На основании трех приведенных выше примеров, мембранный адсорбер Cobetter Purcise™ Q (хроматография) демонстрирует следующие преимущества в процессах анионообменной очистки как для материалов mAb, так и для материалов BsAb:
- Он обеспечивает сопоставимую с традиционными хроматографическими сорбентами эффективность удаления примесей.
- При достижении сопоставимой очистки от примесей он обеспечивает увеличение загрузочной способности на порядок по сравнению с традиционными сорбентами
- Он отличается простой и понятной эксплуатацией с высокими скоростями загрузки, что значительно сокращает время процесса и повышает эффективность производства. Это приводит к существенному улучшению контроля затрат как для клинического, так и для коммерческого производства.